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【原理】

?????? 豬偽狂犬是由偽狂犬病毒(Pseudorabies virus, PRV)引起的家畜和多種野生動物發(fā)生一種急性傳染病。該病以發(fā)熱、奇癢、呼吸和神經(jīng)系統(tǒng)疾病為主要特征?；疾游锊∷缆矢?，但成年豬死亡率低，也不發(fā)生奇癢，妊娠母豬可導(dǎo)致流產(chǎn)、產(chǎn)死胎和木乃伊胎，新生仔豬和斷奶仔豬死亡率較高。檢測特異性抗豬偽狂犬病毒抗體，可作為豬場偽狂犬疫苗的免疫監(jiān)測及該病輔助檢測指標(biāo)。

??????? 本試劑盒采用ELISA方法檢測豬血清中特異性抗偽狂犬病毒IgG抗體。本試劑靈敏度高，特異性強(qiáng)，重復(fù)性好，操作方便快速，可分多次使用。

【試劑組成】

【操作程序】

1．洗滌液配制 用蒸餾水或去離子水將濃縮洗滌液（2號液）按1：10稀釋，如取50ml濃縮液與450ml蒸餾水或去離子水充分混勻即為工作洗滌液。

2．樣本稀釋?? 用樣本稀釋液(5號液)將待檢血清樣本按1：100稀釋，如取5ul樣本與495ul樣本稀釋液，混勻。陰性、陽性對照品不用稀釋，直接加樣。

3．加樣反應(yīng)?? 每次試驗設(shè)陰性對照2孔、陽性及空白對照各1孔(分別加入陰性、陽性對照及樣本稀釋液100ul)。樣本檢測孔每孔加已稀釋血清樣本100ul。37℃避光反應(yīng)30分鐘后，甩去孔內(nèi)液體，每孔注滿工作洗滌液洗滌3次，每次均需停留1分鐘后再甩凈，拍干。

4． 加酶反應(yīng)?? 除空白對照孔外，每孔加酶結(jié)合物(1號液) 1滴。37℃避光反應(yīng)30分鐘后，甩去孔內(nèi)液體，如上洗滌，拍干。

5．顯色反應(yīng)?? 加底物液(3號液)和顯色劑(4號液)各1滴，混勻，37℃避光顯色10分鐘。加終止液(6號液)1滴，終止反應(yīng)（加終止液后，藍(lán)色會變?yōu)辄S色）并判讀結(jié)果。

【結(jié)果判斷】

??????? 陰性對照呈無色或淺黃色，陽性對照呈明顯黃色，表示試驗有效。

??????? 以空白對照調(diào)零，用酶標(biāo)儀于450nm（630nm作參比波長）讀取吸光度（A值）。待檢孔A值大于陰性對照A值平均值的2.1倍者判為陽性。如陰性對照A值的平均值低于0.08時按0.08計算。

【注意事項】

?????? 1.試劑盒于2-8℃保存，有效期12個月。每次使用前應(yīng)先平衡至室溫。

?????? 2.未使用完的板條應(yīng)密封保存。

?????? 3.試劑盒中終止液具有腐蝕性，要小心使用。

?????? 4.瓶蓋每次使用后要擰緊，各瓶蓋之間不可混用。不同批號試劑盒的試劑組份不可混用。

?????? 5.試驗樣本應(yīng)為無染菌、無血脂、無溶血的血清。任何樣本都應(yīng)視為傳染源妥善處理。

?????? 6. 37℃孵育時，建議使用水浴箱。如無條件，可在溫箱中放置濕盒進(jìn)行反應(yīng)并同時用不干膠膜封蓋板孔。

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